【出 处】：

【作 者】：

【摘 要】启动子是基因表达调控的重要元件。在代谢工程和合成生物学研究中,经常需要利用不同强度的启动子对代谢途径进行精细调控,来实现代谢平衡,降低中间产物积累,提高目标产物合成。然而目前可获得的启动子难以满足以上要求,而且不同来源的启动子通用性差,缺乏标准化。针对这些问题,设计了1条88个碱基对的启动子,包含典型的35区、10区以及核糖体结合区。同时,在转录起始位点上游6个碱基、35与10区间隔区14个碱基对中引入简并序列,构建了合成启动子文库。利用合成启动子控制红色荧光蛋白mCherry的表达强度,经过两轮筛选,从5 000多个克隆中获得了720个不同强度的启动子。随机挑选35条不同强度的启动子进行测序分析,结果表明不同强度的启动子具有碱基偏好性。对于强启动子,13位点嘌呤碱基出现频率高,转录起始区除4位点外,嘧啶碱基出现的频率高于嘌呤碱基,而10区与35区间14个位点的嘌呤碱基与嘧啶碱基出现频率大致相当。最后选取5条不同强度启动子应用于顺,顺-粘康酸合成途径调控优化,结果显示不同强度的启动子可以调节目标产物顺,顺-粘康酸的合成和中间产物儿茶酚的积累。