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【摘 要】以甘油为碳源高效合成L-乳酸有助于推进油脂水解产业和生物可降解材料制造业的共同发展。为此，首先分别从凝结芽胞杆菌BacilluscoagulansCICIMB1821和大肠杆菌EscherichiacoliCICIMB0013中克隆了L-乳酸脱氢酶基因BcoaLDH和D-乳酸脱氢酶（LdhA）的启动子片段PfdhA。将两条DNA片段连接组成了表达盒PldhA-BcoaLDH。然后将上述表达盒通过同源重组删除FMN为辅酶的L．乳酸脱氢酶编码基因lldD的同时克隆入ldhA基因缺失菌株E．coliCICIMB0013—080C（ack-ptappspflBdldpoxBadhEfrdAlahA）的染色体上，获得了L-乳酸高产菌株E．coliCICIMB0013-090B（B0013—080C，lldD：：PldhA-BcoaLDH）。考察了菌株CICIMB0013-090B不同培养温度下代谢利用甘油和合成L-乳酸的特征后，建立并优化了一种新型L-乳酸变温发酵工艺。在7L发酵罐上，发酵27h，积累L-乳酸132．4g／L，产酸强度4．90g／（L．h），甘油到L-乳酸的得率为93．7％，L-乳酸的光学纯度达到99．95％。