猪CuZnSOD基因启动子的克隆鉴定及分析
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【摘 要】猪铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)是一种重要的抗氧化酶,其功能已被广泛研究,但CuZnSOD基因的转录调控尚不明确。为了研究猪CuZnSOD基因的核-22启动子区域,并对其转录调控机制进行探讨,运用PCR方法从猪基因组克隆CuZnSOD基因5’上游调控区853bp的片段,然后通过巢式PCR方法获得5’末端逐渐缺失的启动子系列片段,并将这些片段定向插入到荧光素酶报告基因表达载体(pGL3.Basic)中。瞬时转染小鼠胚胎细胞fNIH/3T31,利用双荧光素酶报告基因检测不同长度启动子活性。检测结果显示,在CuZnSOD基因5’上游调控区-87bp和-266bp处分别存在2个潜在转录起始位点,-383bp~+67bp启动区活性最强,进一步缺失分析发现-75bp~-32bp区域内含有猪CuZnSOD基因转录所必需的基础启动子序列,其中存在多个潜在的转录因子结合位点,研究结果提示这些转录因子结合位点可能是参与CuZnSOD基因转录的重要调控序列。
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