【出 处】：

【作 者】：

【摘 要】成纤维细胞生长因子-21（FGF-21）作为近期发现的新型代谢调节因子，因其具有独立于胰岛素调节糖脂代谢、增加胰岛素敏感性等作用，有望成为治疗糖尿病的新型药物。包涵体形式表达外源蛋白表达量及纯度高，但是以pET载体表达时，FGF-21以包涵体形式表达，且复性率及产率低，蛋白活性降低。针对这一瓶颈问题，用SUMO载体首次以包涵体形式表达带有SUMO标签的hFGF-21，通过优化培养条件，并应用中空纤维柱膜过滤技术对菌体进行富集，对包涵体进行洗涤、变性及复性，经过亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法，得到了成熟的hFGF-21，在保证蛋白活性的同时增加了蛋白的产量及纯度。通过检测HepG2细胞葡萄糖吸收及2型糖尿病db／db小鼠短期及长期血糖变化鉴定其降糖生物学活性。结果表明，以包涵体形式表达hFGF．21（ihFGF-21）的表达量是可溶形式表达的hFGF-21（shFGF-21）的3倍，最终ihFGF-21的收率为20mg／L，而shFGF-21的收率仅为6mg／L。ihFGF-21的纯度可达到95％以上，而shFGF-21仅能达到90％左右；在细胞水平和动物水平上两者的降糖生物学活性一致。在保证hFGF-21生物学活性的前提下，与传统包涵体途径提取目的蛋白的方法相比，应用中空纤维柱膜过滤技术使hFGF-21的生产周期缩短了约1／3左右。综上所述，此法为FGF-21中试及工业化生产提供了高效、经济的策略。