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【摘 要】PAC1是神经肽垂体腺苷酸环化酶激活多肽（Pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide，PACAPl的特异受体，属于B族G蛋白偶联受体，介导PACAP的神经递质、神经调质、神经保护、抗神经损伤及调控神经再生等功能，PACI高表达和神经损伤、肿瘤等生理病理过程密切相关。为了深入了解PAC1的功能，构建PAC1可调控表达的细胞系，通过优化的四环素控制表达系统实现PAC1在中国仓鼠卵巢（Chinesehamsterovary，cH0）细胞的强力霉素（doxycycline，Dox）依赖的可控表达。首先通过双酶切将编码PAC1和增强型黄色荧光蛋白（EYFEenhancedyellowfluorescentprotein）的融和基因PAC1-E阶甲克隆到pTRE．Tight载体上，获得重组载体pTRE．PAC1．EYFP；基因测序鉴定正确后将新型的四坏素调节元件载体pTet．onadvanced和反应元件载体pTRE—PAC1．EYFP分别转入CHO细胞中，G418和潮霉素（Hygromycin）双抗筛选阳性克隆PAC1．Tet—CHO，使用梯度浓度四环素类似物强力霉素Dox诱导PAC1-EYFP表达，48h后检测受体表达水平，并通过MTT法检测不同PAC1表达水平的细胞增殖活性。荧光检测和Western印迹结果显示，成功获得了具有良好诱导性的Dox依赖的PAC1可控表达的细胞系，这些细胞株在传10代后仍能稳定地可控表达PAC1。MTT结果显示PAC1表达水平越高，细胞增殖活性越强。成功所构建的Dox依赖的PAC1可控表达细胞系，为PAC1的生物学功能的深入研究奠定了基础。