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【摘 要】从海栖热袍菌扩增出编码乳酸脱氢酶的基因并将其插入热激载体pHsh构建表达质粒，在大肠杆菌Escherichiacoli中进行表达产生极耐热性乳酸脱氢酶Tm-LDH。基因表达产物通过热处理，可以一步获得接近电泳纯的重组酶。酶学性质研究表明，砌．LDH的最适反应温度为95℃，最适pH7．0；纯酶在90℃的半衰期为2h，在pH5．5—8．0之间最稳定；SDS．PAGE结果显示分子量为33kDa，与理论推算值相吻合。以丙酮酸和NADH为底物时，相对于丙酮酸的‰值1．7mmol／L，Vmax为3．8×10^4 U／mg；相对于NADH的‰值7．2mmol／L，Vmax值为1．1×10^5U／mg。Tm．LDH基因在T7载体中未能实现高效表达，但是在热激载体pHsh中得到了可溶性超量表达，表达水平达到340mg／L。该酶在65℃反应条件下，活性达到最高活性的50％，并能保持活性不变，这使该酶能够与常温酶匹配，在辅酶NAD再生体系的建立中具有广泛的用途。