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【摘 要】抗凝血酶Ⅲ（AT Ⅲ）是人体内最重要的抗凝血物质，利用转基因技术生产重组人抗凝血酶III（rhATIII）受到了越来越多的关注，如何有效地将rhAT Ⅲ从转基因羊奶中分离纯化出来是实现其产业化的关键所在。本研究建立了基于等电点沉淀和肝素亲和层析的纯化工艺，实现了rhAT Ⅲ的高效、快速纯化。先用等电点沉淀法，快速去除了占总蛋白50％左右的酪蛋白；然后用肝素亲和层析纯化rhAT Ⅲ，并系统考察了pH值和温度对rhAT Ⅲ,g定性的影响，以及pH值和操作条件（洗脱梯度、流速和上样量）对rhAT Ⅲ分离效果的影响。在优化的条件下，rhATⅢ纯度达到99％以上，蛋白收率达到90％，活性收率约为50％。所建立的纯化工艺简单、快速，rhATⅢ收率高，为今后工艺放大提供了重要的依据和参考。