小鼠睾丸注射不同转染试剂和注射方法对外源基因表达的影响
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【摘 要】为探讨不同转染试剂(Lipofectamine^TM LTX&PLUS^TM、Lipofectamine2000和纳米化聚酰胺.胺型树枝状聚合物(PAMAM-D))和睾丸注射方法(睾丸网注射、曲精细管注射和间质注射)对转基因小鼠生产效率的影响,将pEGFP-Cl质粒分别与不同转染试剂混合后,按照不同的注射方法注入小鼠睾丸内,30d后检测小鼠精子密度、活力、精子阳性率以及配种后仔鼠转基因阳性率。结果3种转染试剂对小鼠繁殖性能影响由小到大依次为Lipofectamine^TM LTX & PLUS^TM、Lipofectamine2000和PAMAM-D。转染后Lipofectamine^TM LTX & PLUS^TM、Lipofectamine 2000和PAMAM-D组精子的GFP阳性率分别为35.65%土0.69%、12.86%土0.35%和10.04%±0.20%。配种后仔鼠的PCR阳性率分别为29.17%、13.70%和5.88%。3种不同注射方法对小鼠睾丸都造成损伤,由小到大依次为睾丸网注射、曲精细管注射和睾丸问质注射,三者的阳性精子比例分别为35.13%士1.727%、15.13%土1.457%和0%,配种后仔鼠的PCR阳性率分别为33_3%、12.5%和0%。结果表明,Lipofectamine^TM LTX & PLUS^TM和睾丸网注射对小鼠睾丸的损伤最小,并能获得较高的转染效率。