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家蚕二分浓核病毒在家蚕细胞中的体外拯救

【出 处】:

【作 者】:

【摘 要】家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus,BmBDV)是特异性感染家蚕中肠引起慢性浓核病症的致病原,基因组含有2套单链DNA分子(VD1和VD2),复制机制尚不清楚.为了能够在体外拯救出有感染性的病毒粒子,构建了BmBDV的基因组全长的克隆质粒pMD 18T-VD1和pUC-VD2,并通过酶切构建的克隆质粒来获得双链的基因组片段VD1和VD2,利用脂质体包埋的方法,线性化共转染BmN细胞.提取转染后的BmN细胞总DNA,经去甲基化处理后,通过PCR检测到病毒基因的复制;提取转染后的BmN细胞和添食回感的家蚕中肠的总蛋白,分别进行蛋白质印记杂交检测,检测到病毒基因的表达.由此首次表明,该病毒线性化的基因组片段通过共转染BmN细胞的方法,可以在体外条件下拯救出具有感染性的病毒粒子.

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