烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】探索获得优良的β-葡萄糖苷酶基因,对实现其工业化生产具有重要意义。烟曲霉Aspergillusfumigatus基因组中含有一个堙,基因(1752bp),编码的蛋白约65kDa,推测为属于糖苷水解酶家族的β-葡萄糖苷酶。将bgl基因克隆并构建了重组表达载体pGEX.bgl,转化大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3),经IPTG诱导获得表达。重组蛋白经亲和层析纯化后,以七叶苷为底物进行了酶学分析,结果表明该酶的最适温度是45℃,最适pH在5.5~6.0之间,对七叶苷的‰值为17.7mmol/L。该酶在pH4~7范围内稳定;70℃保温2h后仍能保持60%的活性。金属离子和化学试剂对酶活性有不同程度的影响,Ca计对重组酶有轻微的激活作用,而SDS可强烈抑制其活性。由于其相对于真菌来源的其他葡萄糖苷酶稳定性较高,为进一步的研究与应用奠定了基础。
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