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【摘 要】探讨α-环糊精糖基转移酶（CGT酶）活性区域-3亚位点（47位赖氨酸残基），-7亚位点（146～152位氨基酸残基）以及环化中心位点（195位酪氨酸残基）对其催化底物形成Y一环糊精（CD）能力的影响。将α-CGT酶相应位点分别进行如下突变：K47T，Y195I，以及146～152位氨基酸残基替换为异亮氨酸（命名为△6），并在大肠杆菌BL21中实现异源活性表达。以可溶性淀粉作为底物进行转化，利用HPLC分析各种突变酶的催化产物中3种环糊精产量和比例。结果表明，和野生酶相比，所有突变酶的淀粉水解活性和环糊精总生成量都有不同程度的下降。在产物的组成方面，突变酶Y1951的催化产物中，α-CD的含量由68％降为30％，β—CD由22．2％提高为33．3％；而γ-CD由8．9％提高为36．7％，含量提高了4倍，取代α-CD成为产物中的主要成分；γ-CD的实际产量为1．1g／L，是野生酶（0．4g／L）的3倍。突变酶K47T和△6的转化产物中α-CD比例有不同程度下降，但仍然是产物中的主要组分，β-和γ-CD的比例都有所增加。由此可见，活性区域中195位氨基酸对于α-CGT酶的活力和催化选择性具有重要的影响，Y195I突变体酶最有利于选择性形成γ—CD。纯化后突变酶Y1951的酶学性质试验表明，其最适反应温度和野生酶相同，但最适反应pH有所提高，且比野生酶具有更好的pH稳定性。因此，突变酶Y195I具有生产制备γ-CD的潜力。