【出 处】：

【作 者】：

【摘 要】通过在乙肝病毒核心蛋白钉突部位插入标签蛋白EGFP及小片段多肽，研究各种改造对HBc功能的影响。采用RLIC方法，构建野生型HBc、HBc钉突部位带不同接头的EGFP融合重组体、缩短的EGFP融合重组体，并构建与HBc功能互补的质粒HBVl．1c-，将不同重组体与HBVl．1c-共转染HEK293细胞，通过观察荧光及Southern blotting检测病毒复制中间体，判断相应基因x-程改造对重组蛋白中不同结构域功能的影响。RLIC方法可有效地用来进行片段缺失，且缺失片段大小及位置无明显限制。带柔性或刚性接头的重组HBc．EGFP均可产生绿色荧光，但荧光在细胞内分布形态不同，两种重组HBc—EGFP均不能支持正常的HBV复制，各种截短的插入片段以及aa79—80单独缺失体亦不能支持HBV复制。结果表明RLIC方法是一种基因工程改造的有力工具，不同类型接头对重组蛋白的结构和功能有不同影响，aa79．80对维持HBc的主要功能之一——支持HBV复制有重要作用。