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【摘 要】为了获得带有His、Myc双标签的SPAG4L蛋白，建立能够稳定表达该蛋白的细胞系，本研究利用PCR技术从人睾丸cDNA中扩增SPAG4L开放阅读框，构建到pcDNA3．1（＋）myc-his真核表达载体中进行测序和双酶切验证。将pcDNA3．1／myc—His（-）A／SPAG4L质粒和空白载体分别转染HeLa细胞，G418筛选后建立稳定转染细胞系。用Western blotting和免疫荧光技术对新建立的稳定转染细胞系进行检测。结果表明，成功扩增了SPAG4L基因，构建到pcDNA3．1／myc—His（．）A真核表达载体后，经酶切和测序验证所插入的SPAG4L序列完全正确；pcDNA3．1／myc．His（-）A／SPAG4L转染HeLa细胞后，经G418筛选后建立了稳定转染细胞系。Western blotting检测后发现，新建立的细胞系能够正确表达SPAG4L及其标签蛋白，进一步的免疫荧光实验发现，SPAG4L能够和内质网标签蛋白PDI共定位。研究结果所提供的稳定转染细胞系将为下一步进行免疫共沉淀和pull．down实验提供了有力的工具。