【出 处】：

【作 者】：

【摘 要】为了研究人成骨细胞刺激因子（Humanosteoblast．stimulatingfactor，OSF．1）的生物学活性，构建OSF．1高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的OSF．1。首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-J基因，并克隆至毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K，构建重组表达质粒pPIC9K／osf-1，线性化后电转化酵母宿主菌GSll5，构建PpastorisGSll5／pPIC9K／osf-1，经MD、G418-YPD平板和PCR法筛选，获得多拷贝转化子。阳性表达菌株在25℃，经1％的甲醇诱导表达96h，重组蛋白的表达量达到最大。经SDS—PAGE电泳分析所表达的重组蛋白约为18kDa，与人成骨细胞刺激因子相符。表达上清经SP．SephadexC．50离子交换层析进行纯化，得到纯度达98％以上的OSF．1。Westernblotting鉴定该蛋白对人成骨细胞刺激因子抗体具有良好的抗原性。生物活性测定表明提纯的OSF．1能促进鼠成骨细胞MC3T3．E1的增殖和分化。利用重组毕赤酵母高效分泌表达了有生物活性的OSF．1，为进一步开展其抗骨质疏松活性研究及产业化开发奠定了基础。