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【摘 要】CFPl0、ESAT6、Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要免疫优势抗原。为了构建一种可同时表达这4种抗原的真核多基因共表达载体pcDNA．CFPl0．ESAT6．Ag85A．Ag85B（pcDNA．CEAB），并利用HEK293T细胞对其体外表达进行检测。采用酶切、连接的方法，将CFPl0和ESAT6编码基因以（Gly4Ser）3蛋白Linker连接，插入至质粒pcDNA3．1（＋）多克隆位点CMV启动子与加尾信号BGHpA之间，使两者融合表达，将Ag85A和Ag85B编码基因以内部核糖体进入位点（Internalribosomeentrysite，IRES）序列连接，并赋予RSV启动子和加尾信号BGHpA，使两者在RSV启动子作用下独立表达。重组质粒经酶切及测序验证后转染至HEK293T细胞中进行体外表达实验，48h后提取总蛋白，利用CFPl0、ESAT6、Ag85A和Ag85B特异性抗体进行Westernblotting检测。结果显示多基因共表达载体pcDNA—CEAB在真核细胞HEK293T中得到表达，且CFPl0、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相应的特异性抗体所识别，表明质粒pcDNA—CEAB构建正确，这为进一步研究其免疫原性和免疫保护效果奠定了基础。